?；钚匝?ROS)酶聯(lián)免疫試劑盒

產(chǎn)品貨號：DM-Cat6796

產(chǎn)品規(guī)格：48/96T

?；钚匝酰≧OS）酶聯(lián)免疫試劑盒是一種用于體外定量檢測牛血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中活性氧含量的工具，以下是其詳細介紹：

檢測原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被牛活性氧（ROS）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP 標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物 TMB 顯色，TMB 在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的?；钚匝酰≧OS）呈正相關，用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

試劑盒組成：酶標包被板：預先包被有 ROS 捕獲抗體的微孔板。

標準品：已知濃度的 ROS 標準溶液，用于繪制標準曲線。

酶標試劑：HRP 標記的檢測抗體，與 ROS 特異性結合。

顯色劑 A 和顯色劑 B：通常 A 液為無色透明液體，B 液為無色或淡黃色透明液體，兩者混合后在 HRP 的作用下發(fā)生顯色反應。

終止液：如硫酸溶液，用于終止顯色反應。

洗滌液：用于洗滌微孔板，去除未結合的物質。

說明書：包含試劑盒的使用方法、注意事項、性能指標等詳細信息。

標本要求：血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，3000 轉離心 30 分鐘取上清。

細胞上清液：3000 轉離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎，3000 轉離心 10 分鐘取上清。

保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于 - 20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作步驟：標準品的稀釋：試劑盒一般提供原倍標準品，用戶可根據(jù)說明書進行梯度稀釋。

加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl，樣品最終稀釋度為 5 倍。

溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

配液：將濃縮洗滌液用蒸餾水按規(guī)定倍數(shù)稀釋后備用。

洗滌：棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復 5 次，拍干。

加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

溫育：同步驟 3。

洗滌：同步驟 5。

顯色：每孔先加入顯色劑 A 50μl，再加入顯色劑 B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 10 分鐘。

終止：每孔加終止液 50μl，終止反應。

測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值），測定應在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

計算方法：以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標準曲線查出相應的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

保存條件及有效期：試劑盒保存于 2-8℃，有效期一般為 6 個月。